更低下限，更高效能！高灵敏度HBV DNA检测为慢乙肝管理精准导航

在说高灵敏度HBV DNA检测之前，让我们先来看看，普通HBV DNA检测的缺陷到底在哪里。在我国，提出高灵敏度HBV DNA检测这一表述有其特殊性，主要是针对我国早期的HBV DNA定量检测试剂灵敏度相对较低而言。

普遍来说，临床采用的普通HBV DNA检测大多都存在灵敏度低、特异性及准确性差、线性范围窄等缺陷。尤其是对于低病毒载量的患者，极易出现假阴性的结果，严重影响临床的预后判断和治疗时机。具体而言，普通HBV DNA检测的缺陷主要体现在以下几个方面。

1.无法准确判断抗病毒治疗的启动

何时启动抗病毒治疗对CHB患者至关重要。

一项来自中国台湾的REVEAL[4]研究，作为乙型肝炎病毒（HBV）感染自然史的标志性研究，发现了基线HBV DNA水平与肝硬化和肝细胞癌（HCC）发生有关。也就是说，HBV DNA载量测定非常重要，关系着后续疾病进展情况。

国内常规的HBV DNA检测下限通常小于1,000IU/mL，这就导致病毒载量在20-1,000IU/mL的CHB患者未能及时启动治疗[5]，严重的甚至会加重疾病病情。

2.无法准确监测抗病毒疗效

普通HBV DNA检测除了不能准确判断CHB患者何时启动治疗外，还无法监测抗病毒治疗后的疗效。

准确监测抗病毒疗效是CHB患者诊疗过程中最重要的一环。

我国河北的一项研究，就对高灵敏度与普通HBV DNA检测在CHB患者抗病毒疗效监测中的区别进行了比较[5]。

研究对49例CHB患者141份采用普通PCR检测结果为阴性（<500 IU/mL）的标本，采用高敏PCR试剂进行复查。结果显示，高敏检测结果为小于20IU/mL的样本数为77份，占54.6%；20-500IU/mL的样本数为45份，占31.9%；有19份样本的检测结果为大于500IU/mL，占13.5%（见表1）。

采用普通PCR检测的患者，实际上有接近一半的人没有准确检测出真实的病毒学应答情况，容易造成误诊，很有可能延误了调整治疗方案的时机。

3.不能准确判断CHB特殊人群的病情

筛查HBV DNA载量不仅影响一般人群启动治疗的时机和治疗效果，也对判断CHB特殊人群（输血、肿瘤、隐匿性感染等）的病情有重要的临床意义。

1978年科学家首次发现HBsAg阴性、核心抗体（抗HBc）阳性的献血者血液可使受血者感染HBV，并提出了OBI（occult hepatitis B virus infection）可能会导致HBV传播的观点[6]。

OBI发生的主要原因是由于肝组织内cccDNA很难被清除，大部分HBV被宿主免疫清除后仍有少量病毒残留，导致HBV低水平复制[7]。普通HBV DNA检测并不能查出这部分HBV DNA低水平患者，最终导致误判，从而造成输血后感染HBV的风险。

肿瘤患者放、化疗后HBV再激活是也一个严重的问题[8]，普通HBV DNA检测可能导致部分患者在筛查时漏诊，治疗期间对于HBV再激活判定延误。此外，对于隐匿性感染、病毒感染后的窗口期以及部分患者存在病毒抗原突变等原因，普通血清学标志物的检查也更容易造成漏诊[9]。

因此，对CHB特殊人群而言，普通HBV DNA检测不仅无法准确判断病情，还会延误判定，最终导致漏诊。

说完了普通HBV DNA检测的缺陷，我们再一起看看，高灵敏度HBV DNA检测的优势。

正如上文所说，高灵敏度HBV DNA检测特异性强、灵敏度高、准确性好，可以使检测下限达到20IU/mL甚至更低。

从各指南可以看出，国内外专家均高度肯定了高灵敏度HBV DNA检测在HBV DNA定量中的意义，这一方面是因为极低水平的HBV DNA在部分人群中确实有着重要的临床意义，另一方面也是因为传统HBV DNA检测已不能满足目前临床的需求。

正因如此，已有不少针对高灵敏度HBV DNA检测的方法学研究报道，成品的试剂盒也逐渐获批进入我国市场[10]。

如表2所示，这几家高灵敏度HBV DNA检测试剂均采用了磁珠法提取HBV核酸，提高了检测效率。此外，这几家试剂检测灵敏度也都能达到10-15IU/mL，线性范围下限达20-30IU/mL。

除了检测下限降低以外，还有哪些指标可以用来评价高灵敏度HBV DNA检测的可靠性呢？

在实际应用中，精确度和准确度是验证HBV DNA检测效能以及可靠性的重要评价指标。

精确度是指在规定条件下，相互独立的测试结果之间的一致程度，常用标准差（SD）和变异系数（CV）表示。准确度则是指检测结果平均值与一个参考量值间的一致程度。

高灵敏度HBV DNA检测具有的精确度高、准确度好等特点已被相关研究证实。

一项中国台湾的研究[11]就对两种高灵敏度HBV DNA定量检测方法（RealTime和TaqMan）的性能进行了比较。结果如表3所示，高灵敏度、精准的HBV DNA检测在整个线性范围内体现了更好的精确度[以雅培为例，RealTime HBV DNA在整个线性范围（10-109IU/ml）内提供精准的结果，根据病毒载量不同，变异系数在0.00%-11.25%之间]，可以为临床关键治疗决策点提供可靠的依据。

此外，北京大学的一项研究[12]也对3种高灵敏度HBV DNA检测方法在关键医疗决策点（55；200；2,000；2×10⁴；2×10⁵IU/mL）上进行了比较，目的是确定高灵敏度HBV DNA是否符合WHO标准品的可追溯性。结果如下图所示，高灵敏度HBV DNA检测（以罗氏cobas HBV DNA检测为例）是符合WHO标准的。

图1.高灵敏度HBV DNA的可追溯性

由此可见，核苷（酸）类似物治疗时代，“精准医学，精准治疗”背景下，高灵敏度HBV DNA检测就是一个优先的选择。

虽说高灵敏度HBV DNA检测分析方式更智能化，对血液标本实施核酸提取、纯化，其回收率高，且重复性也较好，人为误差也有所降低使检测结果更加准确。但高灵敏度HBV DNA试剂推广速度却十分缓慢，除了进口试剂成本高以外，也有临床对高灵敏度HBV DNA检测的临床意义了解不深刻的原因。

都说高灵敏度HBV DNA检测是CHB管理的“导航仪”，那么这台“导航仪”都有哪些功能呢？

1.筛查抗病毒治疗的对象，及时启动抗病毒治疗

我国最新《慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）》[3]强调了抗病毒治疗的时机。

指南明确建议血清HBV DNA阳性、ALT持续异常（＞ ULN）且排除其他原因所致者，建议抗病毒治疗。对于血清HBV DNA阳性的代偿期乙型肝炎肝硬化患者建议抗病毒治疗。高灵敏度HBV DNA检测对于低病毒载量的患者而言，可及时启动抗病毒治疗，降低远期临床风险。

图2.我国慢乙肝指南诊疗路线图

2.治疗过程监测，及时调整治疗方案

近期一些数据也显示，即使接受一线HBV抗病毒药物治疗，仍有20%～37.9%的慢性乙型肝炎患者（CHB）患者处于LLV。可见抗病毒期间出现LLV的比例并不低。

临床上使用高灵敏度HBV DNA检测即可将这部分患者鉴别出来。

2020紫禁城国际药师大会上报告了一项横断面研究[13]，纳入了全国40家医院的636名经抗病毒治疗超过24周，并用当地实验室检测HBV DNA低于检测下限或阴性的CHB成人患者，再用雅培高灵敏度HBV DNA检测试剂（最低检测下限为20 IU/mL）复测，以评估慢性乙型肝炎经治患者的真实病毒学应答情况。

结果显示，HBV DNA≥20 IU/mL的患者比例高达25.3%。

这也说明了，在精准治疗的今天，如果不开展高灵敏度HBV DNA检测，这部分LLV患者难以鉴别出来。短期来看，LLV不仅会增加CHB患者的耐药风险，还会影响后续的治疗应答。长期来看，LLV会使肝纤维化、HCC风险增加，导致长期临床结局堪忧。

由首都医科大学附属北京友谊医院贾继东、尤红教授团队发表的一项研究[14]发现，与肝纤维化逆转患者相比，肝纤维化进展患者接受抗病毒治疗后的应答率更低，且有近30%的患者在恩替卡韦（ETV）治疗后仍可检测到HBV DNA低水平复制（检测下限为20IU/mL）。

这也提示，即使慢乙肝患者接受了抗病毒治疗，若不能完全抑制病毒复制，仍存在对组织学的危害，仍要关注LLV的问题，严格监测HBV DNA水平。

因此，想要严格监测LLV患者的HBV DNA水平，就需要更加精确的HBV DNA检测方式。高灵敏度HBV DNA检测具有灵敏度高、线性范围广、准确度和精确度高等优势，对于CHB管理的起点、拐点、终点的辅助判断发挥着重要作用，是CHB抗病毒治疗之路的“导航仪”！

精准医学环境下，高灵敏度HBV DNA检测是大势所趋，相信以高灵敏度HBV DNA检测为代表的感染性病原体精准检测将逐步规范并广泛应用于临床，最终造福每一位患者。

（来源：转自国际肝病网）